Разбиране на теста Elisa: принцип, стъпки и приложения

Elisa (ензимно-свързан имуносорбентен анализ) е широко използвана техника в молекулярната биология за откриване и количествено определяне на протеини или пептиди в проба. Това включва свързване на целевия протеин или пептид с антитяло, което след това се открива с помощта на ензимен субстрат. Анализът се основава на принципа на конкурентно свързване, където целевият протеин или пептид се конкурира с известен стандарт за свързване с антитялото.

Основните стъпки на анализа Elisa са както следва:

1. Подготовка на проби: Пробите се приготвят чрез извличане на протеините или пептидите, които представляват интерес, от тъканите или клетките.
2. Приготвяне на стандарти: Известни количества от целевия протеин или пептид се приготвят като стандарти.
3. Покритие на плаките: Микротитърните плаки са покрити със специфично антитяло, което се свързва с целевия протеин или пептид.
4. Инкубация и промиване: Пробите и стандартите се добавят към блюдата и се инкубират за определен период от време. След това плочите се измиват, за да се отстрани всеки несвързан материал.
5. Откриване: Субстрат, като например ензимно конюгирано антитяло, се добавя към блюдата и се инкубира за допълнителен период от време. Субстратът се свързва със свързания целеви протеин или пептид, което води до промяна на цвета.
6. Измерване: Интензитетът на цвета се измерва с помощта на спектрофотометър или друг подходящ уред.
7. Изчисление: Количеството целеви протеин или пептид във всяка проба се изчислява въз основа на интензитета на цвета и известната концентрация на стандартите.

Elisa анализите се използват широко в много области, включително имунология, изследване на рак, диагностика на инфекциозни заболявания и лекарства развитие. Те предлагат няколко предимства пред други техники, като Western blotting и радиоимунологични анализи, включително по-висока чувствителност, специфичност и простота.