Pochopení Elisa Assay: Princip, kroky a aplikace

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) je široce používaná technika v molekulární biologii pro detekci a kvantifikaci proteinů nebo peptidů ve vzorku. Zahrnuje vazbu cílového proteinu nebo peptidu na protilátku, která je pak detekována pomocí substrátu na bázi enzymu. Test je založen na principu kompetitivní vazby, kde cílový protein nebo peptid soutěží se známým standardem o vazbu na protilátku.…Základní kroky testu Elisa jsou následující:…1. Příprava vzorků: Vzorky se připravují extrakcí požadovaných proteinů nebo peptidů z tkání nebo buněk.
2. Příprava standardů: Známá množství cílového proteinu nebo peptidu se připraví jako standardy.
3. Potahování destiček: Mikrotitrační destičky jsou potaženy specifickou protilátkou, která se váže na cílový protein nebo peptid.
4. Inkubace a promývání: Vzorky a standardy se přidají na destičky a inkubují se po určitou dobu. Destičky se poté promyjí, aby se odstranil veškerý nenavázaný materiál.
5. Detekce: Substrát, jako je enzym-konjugovaná protilátka, je přidán na destičky a inkubován po další časové období. Substrát se naváže na navázaný cílový protein nebo peptid, což vede ke změně barvy.
6. Měření: Intenzita barvy se měří pomocí spektrofotometru nebo jiného vhodného zařízení.
7. Výpočet: Množství cílového proteinu nebo peptidu v každém vzorku se vypočítá na základě intenzity barvy a známé koncentrace standardů. rozvoj. Nabízejí několik výhod oproti jiným technikám, jako je Western blotting a radioimunoanalýza, včetně vyšší citlivosti, specificity a jednoduchosti.