Forståelse af Elisa Assay: Princip, trin og anvendelser

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) er en meget anvendt teknik inden for molekyl
rbiologi til påvisning og kvantificering af proteiner eller peptider i en prøve. Det involverer binding af målproteinet eller peptidet til et antistof, som derefter påvises ved hj
lp af et enzymbaseret substrat. Assayet er baseret på princippet om kompetitiv binding, hvor målproteinet eller peptidet konkurrerer med en kendt standard for binding til antistoffet.

De grundl
ggende trin i et Elisa-assay er som følger:

1. Forberedelse af prøver: Prøverne fremstilles ved at ekstrahere proteinerne eller peptiderne af interesse fra v
vene eller cellerne.
2. Fremstilling af standarder: Kendte m
ngder af målproteinet eller peptidet fremstilles som standarder.
3. Bel
gning af plader: Mikrotiterplader er belagt med et specifikt antistof, der binder sig til målproteinet eller peptidet.
4. Inkubation og vask: Prøverne og standarderne tils
ttes pladerne og inkuberes i en periode. Pladerne vaskes derefter for at fjerne eventuelt ubundet materiale.
5. Påvisning: Et substrat, såsom et enzym-konjugeret antistof, tils
ttes til pladerne og inkuberes i en yderligere periode. Substratet binder til det bundne målprotein eller peptid, hvilket fører til en farve
ndring.
6. Måling: Farvens intensitet måles ved hj
lp af et spektrofotometer eller andet passende apparat.
7. Beregning: M
ngden af målprotein eller peptid i hver prøve beregnes baseret på intensiteten af farven og den kendte koncentration af standarderne.

Elisa-assays er meget udbredt inden for mange områder, herunder immunologi, cancerforskning, infektionssygdomsdiagnose og l
gemiddel udvikling. De tilbyder flere fordele i forhold til andre teknikker, såsom Western blotting og radioimmunoassays, herunder højere sensitivitet, specificitet og enkelhed.