Elisa-Assay verstehen: Prinzip, Schritte und Anwendungen

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) ist eine weit verbreitete Technik in der Molekularbiologie zum Nachweis und zur Quantifizierung von Proteinen oder Peptiden in einer Probe. Dabei wird das Zielprotein oder -peptid an einen Antikörper gebunden, der dann mithilfe eines enzymbasierten Substrats nachgewiesen wird. Der Assay basiert auf dem Prinzip der kompetitiven Bindung, bei der das Zielprotein oder -peptid mit einem bekannten Standard um die Bindung an den Antikörper konkurriert.

Die grundlegenden Schritte eines Elisa-Assays sind wie folgt:

1. Probenvorbereitung: Die Proben werden durch Extrahieren der interessierenden Proteine oder Peptide aus den Geweben oder Zellen vorbereitet.
2. Vorbereitung von Standards: Bekannte Mengen des Zielproteins oder -peptids werden als Standards vorbereitet.
3. Beschichtung von Platten: Mikrotiterplatten werden mit einem spezifischen Antikörper beschichtet, der an das Zielprotein oder -peptid bindet.
4. Inkubation und Waschen: Die Proben und Standards werden auf die Platten gegeben und für einen bestimmten Zeitraum inkubiert. Anschlie+end werden die Platten gewaschen, um ungebundenes Material zu entfernen.
5. Nachweis: Ein Substrat, beispielsweise ein enzymkonjugierter Antikörper, wird auf die Platten gegeben und für einen weiteren Zeitraum inkubiert. Das Substrat bindet an das gebundene Zielprotein oder -peptid, was zu einer Farbänderung führt.
6. Messung: Die Intensität der Farbe wird mit einem Spektralfotometer oder einem anderen geeigneten Gerät gemessen.
7. Berechnung: Die Menge des Zielproteins oder -peptids in jeder Probe wird auf der Grundlage der Intensität der Farbe und der bekannten Konzentration der Standards berechnet.

Elisa-Assays werden in vielen Bereichen eingesetzt, darunter Immunologie, Krebsforschung, Diagnose von Infektionskrankheiten und Arzneimittel Entwicklung. Sie bieten gegenüber anderen Techniken wie Western Blot und Radioimmunoassays mehrere Vorteile, darunter eine höhere Empfindlichkeit, Spezifität und Einfachheit.