Comprensión del ensayo Elisa: principio, pasos y aplicaciones

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica muy utilizada en biología molecular para detectar y cuantificar proteínas o péptidos en una muestra. Implica unir la proteína o péptido objetivo a un anticuerpo, que luego se detecta utilizando un sustrato a base de enzimas. El ensayo se basa en el principio de unión competitiva, donde la proteína o péptido objetivo compite con un estándar conocido para unirse al anticuerpo. Los pasos básicos de un ensayo Elisa son los siguientes: 1. Preparación de muestras: Las muestras se preparan extrayendo las proteínas o péptidos de interés de los tejidos o células.
2. Preparación de estándares: Se preparan como estándares cantidades conocidas de la proteína o péptido diana.
3. Recubrimiento de placas: Las placas de microtitulación están recubiertas con un anticuerpo específico que se une a la proteína o péptido objetivo.
4. Incubación y lavado: Las muestras y estándares se agregan a las placas y se incuban por un período de tiempo. Luego se lavan las placas para eliminar cualquier material no adherido.5. Detección: Se añade a las placas un sustrato, como un anticuerpo conjugado con enzima, y se incuba durante un período de tiempo adicional. El sustrato se une a la proteína o péptido objetivo unido, lo que provoca un cambio de color.6. Medición: La intensidad del color se mide utilizando un espectrofotómetro u otro dispositivo adecuado.
7. Cálculo: la cantidad de proteína o péptido objetivo en cada muestra se calcula en función de la intensidad del color y la concentración conocida de los estándares. Los ensayos de Elisa se utilizan ampliamente en muchos campos, incluida la inmunología, la investigación del cáncer, el diagnóstico de enfermedades infecciosas y la farmacología. desarrollo. Ofrecen varias ventajas sobre otras técnicas, como la transferencia Western y los radioinmunoensayos, incluida una mayor sensibilidad, especificidad y simplicidad.