Comprendre le test Elisa : principe, étapes et applications

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) est une technique largement utilisée en biologie moléculaire pour détecter et quantifier des protéines ou des peptides dans un échantillon. Il s’agit de lier la protéine ou le peptide cible à un anticorps, qui est ensuite détecté à l’aide d’un substrat à base d’enzyme. Le test est basé sur le principe de liaison compétitive, dans lequel la protéine ou le peptide cible entre en compétition avec un standard connu pour se lier à l'anticorps.

Les étapes de base d'un test Elisa sont les suivantes :

1. Préparation des échantillons : Les échantillons sont préparés en extrayant les protéines ou peptides d'intérêt des tissus ou cellules.
2. Préparation des standards : des quantités connues de la protéine ou du peptide cible sont préparées sous forme de standards.
3. Revêtement des plaques : les plaques de microtitrage sont recouvertes d'un anticorps spécifique qui se lie à la protéine ou au peptide cible.
4. Incubation et lavage : Les échantillons et les standards sont ajoutés aux plaques et incubés pendant un certain temps. Les plaques sont ensuite lavées pour éliminer tout matériau non lié.
5. Détection : Un substrat, tel qu’un anticorps conjugué à une enzyme, est ajouté aux plaques et incubé pendant une période supplémentaire. Le substrat se lie à la protéine ou au peptide cible lié, entraînant un changement de couleur.
6. Mesure : L'intensité de la couleur est mesurée à l'aide d'un spectrophotomètre ou d'un autre appareil approprié.
7. Calcul : La quantité de protéine ou de peptide cible dans chaque échantillon est calculée en fonction de l'intensité de la couleur et de la concentration connue des standards.

Les tests Elisa sont largement utilisés dans de nombreux domaines, notamment l'immunologie, la recherche sur le cancer, le diagnostic des maladies infectieuses et les médicaments. développement. Ils offrent plusieurs avantages par rapport à d’autres techniques, telles que le Western blot et les dosages radio-immunologiques, notamment une sensibilité, une spécificité et une simplicité plus élevées.