एलिसा परख को समझना: सिद्धांत, चरण और अनुप्रयोग
एलिसा (एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख) एक नमूने में प्रोटीन या पेप्टाइड्स का पता लगाने और मात्रा निर्धारित करने के लिए आणविक जीव विज्ञान में व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली तकनीक है। इसमें लक्ष्य प्रोटीन या पेप्टाइड को एक एंटीबॉडी से बांधना शामिल है, जिसे फिर एक एंजाइम-आधारित सब्सट्रेट का उपयोग करके पता लगाया जाता है। परख प्रतिस्पर्धी बंधन के सिद्धांत पर आधारित है, जहां लक्ष्य प्रोटीन या पेप्टाइड एंटीबॉडी से जुड़ने के लिए ज्ञात मानक के साथ प्रतिस्पर्धा करता है। एलिसा परख के मूल चरण इस प्रकार हैं:
1. नमूनों की तैयारी: ऊतकों या कोशिकाओं से रुचि के प्रोटीन या पेप्टाइड्स निकालकर नमूने तैयार किए जाते हैं।
2. मानकों की तैयारी: लक्ष्य प्रोटीन या पेप्टाइड की ज्ञात मात्रा को मानकों के रूप में तैयार किया जाता है।
3. प्लेटों की कोटिंग: माइक्रोटिटर प्लेटों को एक विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ लेपित किया जाता है जो लक्ष्य प्रोटीन या पेप्टाइड से बांधता है।
4। ऊष्मायन और धुलाई: नमूनों और मानकों को प्लेटों में जोड़ा जाता है और कुछ समय के लिए ऊष्मायन किया जाता है। फिर किसी भी अनबाउंड सामग्री को हटाने के लिए प्लेटों को धोया जाता है।
5. जांच: एक सब्सट्रेट, जैसे कि एंजाइम-संयुग्मित एंटीबॉडी, को प्लेटों में जोड़ा जाता है और आगे की अवधि के लिए इनक्यूबेट किया जाता है। सब्सट्रेट बाध्य लक्ष्य प्रोटीन या पेप्टाइड से बंध जाता है, जिससे रंग बदल जाता है।
6। माप: रंग की तीव्रता को स्पेक्ट्रोफोटोमीटर या अन्य उपयुक्त उपकरण का उपयोग करके मापा जाता है।
7. गणना: प्रत्येक नमूने में लक्ष्य प्रोटीन या पेप्टाइड की मात्रा की गणना रंग की तीव्रता और मानकों की ज्ञात सांद्रता के आधार पर की जाती है। एलिसा परीक्षण का व्यापक रूप से इम्यूनोलॉजी, कैंसर अनुसंधान, संक्रामक रोग निदान और दवा सहित कई क्षेत्रों में उपयोग किया जाता है। विकास। वे अन्य तकनीकों की तुलना में कई फायदे प्रदान करते हैं, जैसे कि वेस्टर्न ब्लॉटिंग और रेडियोइम्यूनोएसेज़, जिनमें उच्च संवेदनशीलता, विशिष्टता और सरलता शामिल है।
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