Az Elisa Assay megértése: elv, lépések és alkalmazások

Az Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) egy széles körben használt technika a molekuláris biológiában fehérjék vagy peptidek kimutatására és mennyiségi meghatározására egy mintában. Ez magában foglalja a megcélzott fehérje vagy peptid antitesthez való kötését, amelyet azután enzimalapú szubsztrát segítségével detektálnak. A teszt a kompetitív kötődés elvén alapul, ahol a célfehérje vagy peptid egy ismert standarddal verseng az antitesthez való kötődésért.

Az Elisa-teszt alapvető lépései a következők:

1. A minták előkészítése: A mintákat úgy állítják elő, hogy a szövetekből vagy sejtekből kivonják a kérdéses fehérjéket vagy peptideket.
2. Standardok készítése: A célfehérjét vagy peptidet ismert mennyiségben állítják elő standardként.
3. Lemezek bevonása: A mikrotiterlemezeket specifikus antitesttel vonják be, amely a célfehérjéhez vagy peptidhez kötődik.
4. Inkubálás és mosás: A mintákat és a standardokat a lemezekre adjuk, és egy ideig inkubáljuk. A lemezeket ezután mossuk, hogy eltávolítsuk a meg nem kötött anyagot.
5. Kimutatás: Egy szubsztrátot, például egy enzimmel konjugált antitestet adunk a lemezekhez, és további ideig inkubáljuk. A szubsztrát a megkötött célfehérjéhez vagy peptidhez kötődik, ami színváltozáshoz vezet.
6. Mérés: A szín intenzitását spektrofotométerrel vagy más alkalmas eszközzel mérjük.
7. Számítás: Az egyes mintákban lévő célfehérje vagy peptid mennyiségét a szín intenzitása és a standardok ismert koncentrációja alapján számítjuk ki.

Elisa-teszteket széles körben alkalmaznak számos területen, beleértve az immunológiát, a rákkutatást, a fertőző betegségek diagnosztizálását és a gyógyszereket. fejlesztés. Számos előnnyel rendelkeznek más technikákkal szemben, mint például a Western blotting és a radioimmunoassay, beleértve a nagyobb érzékenységet, specificitást és egyszerűséget.