Pengertian Elisa Assay: Prinsip, Langkah, dan Penerapannya

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) adalah teknik yang banyak digunakan dalam biologi molekuler untuk mendeteksi dan mengukur protein atau peptida dalam sampel. Ini melibatkan pengikatan protein target atau peptida ke antibodi, yang kemudian dideteksi menggunakan substrat berbasis enzim. Pengujian ini didasarkan pada prinsip pengikatan kompetitif, yaitu protein atau peptida target bersaing dengan standar yang diketahui untuk mengikat antibodi.

Langkah-langkah dasar pengujian Elisa adalah sebagai berikut:

1. Persiapan sampel: Sampel disiapkan dengan mengekstraksi protein atau peptida yang diinginkan dari jaringan atau sel.
2. Persiapan standar: Jumlah protein target atau peptida yang diketahui disiapkan sebagai standar.
3. Pelapisan pelat: Pelat mikrotiter dilapisi dengan antibodi spesifik yang berikatan dengan protein target atau peptida.
4. Inkubasi dan pencucian: Sampel dan standar ditambahkan ke dalam cawan dan diinkubasi selama jangka waktu tertentu. Pelat tersebut kemudian dicuci untuk menghilangkan bahan yang tidak terikat.
5. Deteksi: Substrat, seperti antibodi terkonjugasi enzim, ditambahkan ke pelat dan diinkubasi selama jangka waktu berikutnya. Substrat berikatan dengan protein atau peptida target yang terikat, sehingga menyebabkan perubahan warna.
6. Pengukuran: Intensitas warna diukur dengan menggunakan spektrofotometer atau alat lain yang sesuai.
7. Perhitungan: Jumlah protein target atau peptida dalam setiap sampel dihitung berdasarkan intensitas warna dan konsentrasi standar yang diketahui.

Tes Elisa banyak digunakan di berbagai bidang, termasuk imunologi, penelitian kanker, diagnosis penyakit menular, dan obat-obatan. perkembangan. Teknik ini menawarkan beberapa keunggulan dibandingkan teknik lain, seperti Western blotting dan radioimmunoassay, termasuk sensitivitas, spesifisitas, dan kesederhanaan yang lebih tinggi.