Memahami Elisa Assay: Prinsip, Langkah dan Aplikasi

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) ialah teknik yang digunakan secara meluas dalam biologi molekul untuk mengesan dan mengukur protein atau peptida dalam sampel. Ia melibatkan pengikatan protein sasaran atau peptida kepada antibodi, yang kemudiannya dikesan menggunakan substrat berasaskan enzim. Ujian adalah berdasarkan prinsip pengikatan kompetitif, di mana protein sasaran atau peptida bersaing dengan piawaian yang diketahui untuk mengikat antibodi.

Langkah asas ujian Elisa adalah seperti berikut:

1. Penyediaan sampel: Sampel disediakan dengan mengekstrak protein atau peptida yang diminati daripada tisu atau sel.
2. Penyediaan piawai: Jumlah diketahui protein sasaran atau peptida disediakan sebagai piawaian.
3. Salutan plat: Plat mikrotiter disalut dengan antibodi khusus yang mengikat protein sasaran atau peptida.
4. Pengeraman dan pencucian: Sampel dan piawaian ditambah pada pinggan dan diinkubasi untuk satu tempoh masa. Pinggan kemudiannya dibasuh untuk mengeluarkan sebarang bahan yang tidak terikat.
5. Pengesanan: Substrat, seperti antibodi terkonjugasi enzim, ditambahkan pada plat dan diinkubasi untuk tempoh masa yang lebih lama. Substrat mengikat kepada protein sasaran atau peptida yang terikat, membawa kepada perubahan warna.
6. Pengukuran: Keamatan warna diukur menggunakan spektrofotometer atau alat lain yang sesuai.
7. Pengiraan: Jumlah protein sasaran atau peptida dalam setiap sampel dikira berdasarkan keamatan warna dan kepekatan piawai yang diketahui.

Ujian Elisa digunakan secara meluas dalam banyak bidang, termasuk imunologi, penyelidikan kanser, diagnosis penyakit berjangkit dan ubat. pembangunan. Mereka menawarkan beberapa kelebihan berbanding teknik lain, seperti Western blotting dan radioimmunoassays, termasuk sensitiviti, kekhususan dan kesederhanaan yang lebih tinggi.