Forstå Elisa Assay: Prinsipp, trinn og anvendelser

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) er en mye brukt teknikk innen molekyl
rbiologi for å påvise og kvantifisere proteiner eller peptider i en prøve. Det inneb
rer å binde målproteinet eller peptidet til et antistoff, som deretter påvises ved hjelp av et enzymbasert substrat. Analysen er basert på prinsippet om konkurrerende binding, der målproteinet eller peptidet konkurrerer med en kjent standard for binding til antistoffet.

De grunnleggende trinnene i en Elisa-analyse er som følger:

1. Preparering av prøver: Prøvene prepareres ved å trekke ut proteinene eller peptidene av interesse fra vevene eller cellene.
2. Utarbeidelse av standarder: Kjente mengder av målproteinet eller peptidet fremstilles som standarder.
3. Belegg av plater: Mikrotiterplater er belagt med et spesifikt antistoff som binder seg til målproteinet eller peptidet.
4. Inkubering og vasking: Prøvene og standardene legges til platene og inkuberes i en periode. Platene vaskes deretter for å fjerne eventuelt ubundet materiale.
5. Deteksjon: Et substrat, slik som et enzymkonjugert antistoff, legges til platene og inkuberes i en ytterligere periode. Substratet binder seg til det bundne målproteinet eller peptidet, noe som fører til en fargeendring.
6. Måling: Intensiteten til fargen måles ved hjelp av et spektrofotometer eller annet egnet apparat.
7. Beregning: Mengden av målprotein eller peptid i hver prøve beregnes basert på intensiteten til fargen og den kjente konsentrasjonen av standardene.

Elisa-analyser er mye brukt på mange felt, inkludert immunologi, kreftforskning, infeksjonssykdomsdiagnose og medikamenter. utvikling. De tilbyr flere fordeler i forhold til andre teknikker, som Western blotting og radioimmunoassays, inkludert høyere sensitivitet, spesifisitet og enkelhet.