Zrozumienie testu Elisa: zasada, kroki i zastosowania

Elisa (test immunoenzymatyczny) jest szeroko stosowaną techniką w biologii molekularnej do wykrywania i oznaczania ilościowego białek lub peptydów w próbce. Polega na wiązaniu docelowego białka lub peptydu z przeciwciałem, które jest następnie wykrywane przy użyciu substratu na bazie enzymu. Test opiera się na zasadzie wiązania konkurencyjnego, w której docelowe białko lub peptyd konkuruje ze znanym standardem o wiązanie z przeciwciałem.……Podstawowe etapy testu Elisa są następujące:……1. Przygotowanie próbek: Próbki przygotowuje się poprzez ekstrakcję białek lub peptydów będących przedmiotem zainteresowania z tkanek lub komórek.
2. Przygotowanie standardów: Jako standardy przygotowuje się znane ilości docelowego białka lub peptydu.
3. Powlekanie płytek: Płytki do mikromiareczkowania powleka się specyficznym przeciwciałem, które wiąże się z docelowym białkiem lub peptydem.
4. Inkubacja i płukanie: Próbki i standardy dodaje się do płytek i inkubuje przez pewien okres czasu. Następnie płytki płucze się w celu usunięcia niezwiązanego materiału. 5. Wykrywanie: Do płytek dodaje się substrat, taki jak przeciwciało skoniugowane z enzymem, i inkubuje przez dalszy okres czasu. Substrat wiąże się ze związanym docelowym białkiem lub peptydem, co prowadzi do zmiany koloru.
6. Pomiar: Intensywność koloru mierzy się za pomocą spektrofotometru lub innego odpowiedniego urządzenia.
7. Obliczenia: Ilość docelowego białka lub peptydu w każdej próbce jest obliczana na podstawie intensywności koloru i znanego stężenia standardów.

Testy Elisa są szeroko stosowane w wielu dziedzinach, w tym w immunologii, badaniach nad nowotworami, diagnostyce chorób zakaźnych i lekach rozwój. Oferują one kilka zalet w porównaniu z innymi technikami, takimi jak Western blot i testy radioimmunologiczne, w tym wyższą czułość, swoistość i prostotę.