Compreendendo o ensaio Elisa: princípio, etapas e aplicações

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) é uma técnica amplamente utilizada em biologia molecular para detectar e quantificar proteínas ou peptídeos em uma amostra. Envolve a ligação da proteína ou peptídeo alvo a um anticorpo, que é então detectado usando um substrato baseado em enzima. O ensaio é baseado no princípio da ligação competitiva, onde a proteína ou peptídeo alvo compete com um padrão conhecido para ligação ao anticorpo.

As etapas básicas de um ensaio Elisa são as seguintes:

1. Preparação de amostras: As amostras são preparadas extraindo as proteínas ou peptídeos de interesse dos tecidos ou células. Preparação de padrões: Quantidades conhecidas da proteína ou peptídeo alvo são preparadas como padrões. Revestimento de placas: As placas de microtitulação são revestidas com um anticorpo específico que se liga à proteína ou peptídeo alvo. Incubação e lavagem: As amostras e padrões são adicionados às placas e incubados por um período de tempo. As placas são então lavadas para remover qualquer material não ligado. Detecção: Um substrato, tal como um anticorpo conjugado com enzima, é adicionado às placas e incubado por mais um período de tempo. O substrato liga-se à proteína ou peptídeo alvo ligado, levando a uma mudança de cor. Medição: A intensidade da cor é medida utilizando um espectrofotômetro ou outro dispositivo adequado.
7. Cálculo: A quantidade de proteína ou peptídeo alvo em cada amostra é calculada com base na intensidade da cor e na concentração conhecida dos padrões.

Os ensaios Elisa são amplamente utilizados em muitos campos, incluindo imunologia, pesquisa de câncer, diagnóstico de doenças infecciosas e medicamentos. desenvolvimento. Eles oferecem diversas vantagens sobre outras técnicas, como Western blotting e radioimunoensaios, incluindo maior sensibilidade, especificidade e simplicidade.