Понимание анализа Elisa: принцип, этапы и применение

Элиза (иммуноферментный анализ) — широко используемый метод в молекулярной биологии для обнаружения и количественного определения белков или пептидов в образце. Он включает связывание целевого белка или пептида с антителом, которое затем обнаруживается с помощью ферментного субстрата. Анализ основан на принципе конкурентного связывания, при котором целевой белок или пептид конкурирует с известным стандартом за связывание с антителом.

Основные этапы ИФА-анализа следующие:

1. Подготовка образцов: Образцы готовятся путем экстракции интересующих белков или пептидов из тканей или клеток.
2. Приготовление стандартов. В качестве стандартов готовят известные количества целевого белка или пептида.3. Покрытие планшетов: Планшеты для микротитрования покрыты специфическим антителом, которое связывается с целевым белком или пептидом.
4. Инкубация и промывка. Образцы и стандарты добавляются в чашки и инкубируются в течение определенного периода времени. Затем планшеты промывают для удаления несвязавшегося материала.5. Обнаружение: В планшеты добавляют субстрат, такой как антитело, конъюгированное с ферментом, и инкубируют в течение дополнительного периода времени. Субстрат связывается со связанным целевым белком или пептидом, что приводит к изменению цвета.6. Измерение: Интенсивность цвета измеряется с помощью спектрофотометра или другого подходящего устройства.
7. Расчет: количество целевого белка или пептида в каждом образце рассчитывается на основе интенсивности цвета и известной концентрации стандартов. Анализы Elisa широко используются во многих областях, включая иммунологию, исследования рака, диагностику инфекционных заболеваний и разработку лекарств. разработка. Они предлагают ряд преимуществ перед другими методами, такими как вестерн-блоттинг и радиоиммуноанализы, включая более высокую чувствительность, специфичность и простоту.