Förstå Elisa Assay: principer, steg och tillämpningar

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) är en mycket använd teknik inom molekylärbiologi för att detektera och kvantifiera proteiner eller peptider i ett prov. Det innebär att målproteinet eller peptiden binds till en antikropp, som sedan detekteras med hjälp av ett enzymbaserat substrat. Analysen är baserad på principen om kompetitiv bindning, där målproteinet eller peptiden konkurrerar med en känd standard för bindning till antikroppen.

De grundläggande stegen i en Elisa-analys är följande:

1. Beredning av prover: Proverna framställs genom att extrahera proteinerna eller peptiderna av intresse från vävnaderna eller cellerna.
2. Framställning av standarder: Kända mängder av målproteinet eller peptiden framställs som standarder.
3. Beläggning av plattor: Mikrotiterplattor är belagda med en specifik antikropp som binder till målproteinet eller peptiden.
4. Inkubation och tvättning: Proverna och standarderna läggs till plattorna och inkuberas under en viss tid. Plattorna tvättas sedan för att avlägsna eventuellt obundet material.
5. Detektion: Ett substrat, såsom en enzymkonjugerad antikropp, tillsätts till plattorna och inkuberas under ytterligare en tidsperiod. Substratet binder till det bundna målproteinet eller peptiden, vilket leder till en färgförändring.
6. Mätning: Färgens intensitet mäts med en spektrofotometer eller annan lämplig anordning.
7. Beräkning: Mängden målprotein eller peptid i varje prov beräknas baserat på färgens intensitet och den kända koncentrationen av standarderna.

Elisa-analyser används i stor utsträckning inom många områden, inklusive immunologi, cancerforskning, diagnostik av infektionssjukdomar och läkemedel utveckling. De erbjuder flera fördelar jämfört med andra tekniker, såsom Western blotting och radioimmunoanalyser, inklusive högre känslighet, specificitet och enkelhet.