Elisa Testini Anlamak: Prensip, Adımlar ve Uygulamalar

Elisa (Enzim Bağlantılı İmmünosorbent Testi), bir numunedeki proteinleri veya peptitleri tespit etmek ve ölçmek için moleküler biyolojide yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Hedef proteinin veya peptidin bir antikora bağlanmasını içerir ve bu daha sonra enzim bazlı bir substrat kullanılarak tespit edilir. Test, hedef protein veya peptidin antikora bağlanmak için bilinen bir standartla rekabet ettiği rekabetçi bağlanma ilkesine dayanmaktadır.

Elisa testinin temel adımları aşağıdaki gibidir:

1. Örneklerin hazırlanması: Örnekler, ilgilenilen proteinlerin veya peptidlerin dokulardan veya hücrelerden ekstrakte edilmesiyle hazırlanır.
2. Standartların hazırlanması: Hedef protein veya peptidin bilinen miktarları standart olarak hazırlanır.
3. Plakaların kaplanması: Mikrotitre plakaları, hedef proteine veya peptite bağlanan spesifik bir antikorla kaplanır.
4. İnkübasyon ve yıkama: Numuneler ve standartlar plaklara eklenir ve bir süre inkübe edilir. Plakalar daha sonra bağlanmamış materyalin uzaklaştırılması için yıkanır.
5. Tespit: Enzimle konjuge edilmiş antikor gibi bir substrat plakalara eklenir ve bir süre daha inkübe edilir. Substrat, bağlı hedef proteine veya peptite bağlanarak renk değişikliğine yol açar.
6. Ölçüm: Rengin yoğunluğu bir spektrofotometre veya başka uygun bir cihaz kullanılarak ölçülür.
7. Hesaplama: Her numunedeki hedef protein veya peptit miktarı, rengin yoğunluğuna ve standartların bilinen konsantrasyonuna göre hesaplanır.

Elisa tahlilleri immünoloji, kanser araştırmaları, bulaşıcı hastalık teşhisi ve ilaç dahil olmak üzere birçok alanda yaygın olarak kullanılmaktadır. gelişim. Western blotlama ve radyoimmünoanalizler gibi diğer tekniklere göre daha yüksek hassasiyet, özgüllük ve basitlik gibi çeşitli avantajlar sunarlar.