Розуміння аналізу Elisa: принцип, кроки та застосування

Еліза (імуноферментний аналіз) — це широко використовуваний метод у молекулярній біології для виявлення та кількісного визначення білків або пептидів у зразку. Він передбачає зв’язування цільового білка або пептиду з антитілом, яке потім виявляється за допомогою субстрату на основі ферменту. Аналіз базується на принципі конкурентного зв’язування, коли цільовий білок або пептид конкурує з відомим стандартом за зв’язування з антитілом.

Основні етапи аналізу ELISA такі:

1. Підготовка зразків: зразки готують шляхом екстрагування білків або пептидів, що цікавлять, із тканин або клітин.
2. Приготування стандартів: відомі кількості цільового білка або пептиду готують як стандарти.
3. Покриття планшетів: мікропланшети покриті специфічним антитілом, яке зв’язується з цільовим білком або пептидом.
4. Інкубація та промивання: зразки та стандарти додають до планшетів та інкубують протягом певного періоду часу. Потім пластини промивають для видалення будь-якого незв’язаного матеріалу.
5. Виявлення: Субстрат, такий як кон’юговане з ферментом антитіло, додають до планшетів та інкубують протягом наступного періоду часу. Субстрат зв’язується зі зв’язаним цільовим білком або пептидом, що призводить до зміни кольору.
6. Вимірювання: інтенсивність кольору вимірюється за допомогою спектрофотометра або іншого відповідного приладу.
7. Розрахунок: кількість цільового білка або пептиду в кожному зразку розраховується на основі інтенсивності забарвлення та відомої концентрації стандартів.

Аналіз Еліза широко використовується в багатьох галузях, включаючи імунологію, дослідження раку, діагностику інфекційних захворювань і лікарські засоби. розвитку. Вони пропонують кілька переваг перед іншими методами, такими як Вестерн-блот і радіоімунологічний аналіз, включаючи вищу чутливість, специфічність і простоту.