Elisa Assayn ymmärtäminen: periaate, vaiheet ja sovellukset

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) on molekyylibiologiassa laajalti käytetty tekniikka proteiinien tai peptidien havaitsemiseksi ja kvantifioimiseksi näytteestä. Se sisältää kohdeproteiinin tai -peptidin sitomisen vasta-aineeseen, joka sitten havaitaan käyttämällä entsyymipohjaista substraattia. Määritys perustuu kilpailevan sitoutumisen periaatteeseen, jossa kohdeproteiini tai -peptidi kilpailee tunnetun standardin kanssa sitoutumisesta vasta-aineeseen.

Elisa-määrityksen perusvaiheet ovat seuraavat:

1. Näytteiden valmistelu: Näytteet valmistetaan uuttamalla kiinnostavat proteiinit tai peptidit kudoksista tai soluista.
2. Standardien valmistus: Tunnetut määrät kohdeproteiinia tai -peptidiä valmistetaan standardeina.
3. Levyjen päällystys: Mikrotiitterilevyt päällystetään spesifisellä vasta-aineella, joka sitoutuu kohdeproteiiniin tai -peptidiin.
4. Inkubointi ja pesu: Näytteet ja standardit lisätään levyille ja inkuboidaan jonkin aikaa. Levyt pestään sitten sitoutumattoman materiaalin poistamiseksi.
5. Havaitseminen: Substraatti, kuten entsyymiin konjugoitu vasta-aine, lisätään levyille ja inkuboidaan vielä lisäaika. Substraatti sitoutuu sitoutuneeseen kohdeproteiiniin tai -peptidiin, mikä johtaa värin muutokseen.
6. Mittaus: Värin intensiteetti mitataan spektrofotometrillä tai muulla sopivalla laitteella.
7. Laskenta: Kohdeproteiinin tai -peptidin määrä kussakin näytteessä lasketaan värin intensiteetin ja standardien tunnetun pitoisuuden perusteella. Elisa-määrityksiä käytetään laajasti monilla aloilla, mukaan lukien immunologia, syöpätutkimus, tartuntatautien diagnosointi ja lääketiede kehitystä. Ne tarjoavat useita etuja verrattuna muihin tekniikoihin, kuten Western blot -menetelmään ja radioimmunomäärityksiin, mukaan lukien korkeampi herkkyys, spesifisyys ja yksinkertaisuus.