Comprendere il test Elisa: principio, passaggi e applicazioni

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) è una tecnica ampiamente utilizzata in biologia molecolare per rilevare e quantificare proteine o peptidi in un campione. Implica il legame della proteina o del peptide bersaglio a un anticorpo, che viene poi rilevato utilizzando un substrato a base enzimatica. Il test si basa sul principio del legame competitivo, in cui la proteina o il peptide bersaglio compete con uno standard noto per legarsi all'anticorpo.

I passaggi fondamentali di un test Elisa sono i seguenti:

1. Preparazione dei campioni: i campioni vengono preparati estraendo le proteine o i peptidi di interesse dai tessuti o dalle cellule.
2. Preparazione degli standard: quantità note della proteina o del peptide bersaglio vengono preparate come standard.
3. Rivestimento delle piastre: le piastre per microtitolazione sono rivestite con un anticorpo specifico che si lega alla proteina o al peptide bersaglio.
4. Incubazione e lavaggio: i campioni e gli standard vengono aggiunti alle piastre e incubati per un periodo di tempo. Le piastre vengono quindi lavate per rimuovere tutto il materiale non legato.
5. Rilevazione: un substrato, come un anticorpo coniugato con un enzima, viene aggiunto alle piastre e incubato per un ulteriore periodo di tempo. Il substrato si lega alla proteina o al peptide bersaglio legato, determinando un cambiamento di colore.
6. Misurazione: l'intensità del colore viene misurata utilizzando uno spettrofotometro o altro dispositivo idoneo.
7. Calcolo: la quantità di proteina o peptide bersaglio in ciascun campione viene calcolata in base all'intensità del colore e alla concentrazione nota degli standard.

I test Elisa sono ampiamente utilizzati in molti campi, tra cui l'immunologia, la ricerca sul cancro, la diagnosi di malattie infettive e la ricerca farmaceutica sviluppo. Offrono numerosi vantaggi rispetto ad altre tecniche, come il Western blotting e i test radioimmunologici, tra cui maggiore sensibilità, specificità e semplicità.