ทำความเข้าใจ Elisa Assay: หลักการ ขั้นตอน และการประยุกต์
เอลิซา (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) เป็นเทคนิคที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในอณูชีววิทยาสำหรับการตรวจจับและหาปริมาณโปรตีนหรือเปปไทด์ในตัวอย่าง โดยเกี่ยวข้องกับการจับโปรตีนหรือเปปไทด์เป้าหมายกับแอนติบอดี ซึ่งตรวจพบโดยใช้สารตั้งต้นที่มีเอนไซม์ การทดสอบจะขึ้นอยู่กับหลักการของการจับแบบแข่งขัน โดยที่โปรตีนหรือเปปไทด์เป้าหมายแข่งขันกับมาตรฐานที่ทราบสำหรับการจับกับแอนติบอดี ขั้นตอนพื้นฐานของการทดสอบ Elisa มีดังนี้:
1 การเตรียมตัวอย่าง: ตัวอย่างจะถูกเตรียมโดยการสกัดโปรตีนหรือเปปไทด์ที่สนใจจากเนื้อเยื่อหรือเซลล์
2 การเตรียมมาตรฐาน: ปริมาณโปรตีนหรือเปปไทด์เป้าหมายที่ทราบถูกจัดเตรียมไว้ตามมาตรฐาน
3 การเคลือบเพลต: เพลตไมโครไทเตอร์ถูกเคลือบด้วยแอนติบอดีจำเพาะที่จับกับโปรตีนเป้าหมายหรือเปปไทด์
4 การฟักตัวและการล้าง: ตัวอย่างและสารมาตรฐานจะถูกเติมลงในจานและบ่มเป็นระยะเวลาหนึ่ง จากนั้นล้างจานเพื่อเอาวัสดุที่ยังไม่พันกันออก
5. การตรวจจับ: สารตั้งต้น เช่น แอนติบอดีที่ควบด้วยเอนไซม์ จะถูกเติมลงในเพลตและบ่มต่อไปอีกช่วงระยะเวลาหนึ่ง สารตั้งต้นจับกับโปรตีนหรือเปปไทด์เป้าหมายที่ถูกผูกไว้ ทำให้เกิดการเปลี่ยนสี
6 การวัด: ความเข้มของสีวัดโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์หรืออุปกรณ์ที่เหมาะสมอื่นๆ
7 การคำนวณ: ปริมาณโปรตีนหรือเปปไทด์เป้าหมายในแต่ละตัวอย่างจะคำนวณตามความเข้มของสีและความเข้มข้นที่ทราบของมาตรฐาน การตรวจ Elisa มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในหลายสาขา รวมถึงวิทยาภูมิคุ้มกัน การวิจัยโรคมะเร็ง การวินิจฉัยโรคติดเชื้อ และยา การพัฒนา. มีข้อได้เปรียบเหนือเทคนิคอื่นๆ หลายประการ เช่น Western blotting และ radioimmunoassays รวมถึงความไว ความจำเพาะ และความเรียบง่ายที่สูงกว่า
ฉันชอบวิดีโอนี้
ฉันไม่ชอบวิดีโอนี้
รายงานข้อผิดพลาดของเนื้อหา
share
