Tìm hiểu xét nghiệm Elisa: Nguyên tắc, các bước và ứng dụng

Elisa (Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme) là một kỹ thuật được sử dụng rộng rãi trong sinh học phân tử để phát hiện và định lượng protein hoặc peptide trong một mẫu. Nó liên quan đến việc liên kết protein hoặc peptide mục tiêu với một kháng thể, sau đó được phát hiện bằng cách sử dụng cơ chất dựa trên enzyme. Xét nghiệm dựa trên nguyên tắc liên kết cạnh tranh, trong đó protein hoặc peptide mục tiêu cạnh tranh với một tiêu chuẩn đã biết để liên kết với kháng thể.

Các bước cơ bản của xét nghiệm Elisa như sau:

1. Chuẩn bị mẫu: Các mẫu được chuẩn bị bằng cách chiết xuất các protein hoặc peptide quan tâm từ các mô hoặc tế bào.
2. Chuẩn bị chất chuẩn: Lượng protein hoặc peptide mục tiêu đã biết được chuẩn bị làm chất chuẩn.
3. Lớp phủ các tấm: Các tấm microtiter được phủ một kháng thể cụ thể liên kết với protein hoặc peptide mục tiêu.
4. Ủ và rửa: Các mẫu và chất chuẩn được thêm vào các đĩa và ủ trong một khoảng thời gian. Sau đó, các tấm này được rửa sạch để loại bỏ mọi vật liệu không liên kết.
5. Phát hiện: Một chất nền, chẳng hạn như kháng thể liên hợp enzyme, được thêm vào các đĩa và ủ trong một khoảng thời gian nữa. Chất nền liên kết với protein hoặc peptide mục tiêu bị ràng buộc, dẫn đến sự thay đổi màu sắc.
6. Đo lường: Cường độ màu được đo bằng máy quang phổ hoặc thiết bị phù hợp khác.
7. Tính toán: Lượng protein hoặc peptide mục tiêu trong mỗi mẫu được tính toán dựa trên cường độ màu sắc và nồng độ đã biết của chất chuẩn. Xét nghiệm

Elisa được sử dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực, bao gồm miễn dịch học, nghiên cứu ung thư, chẩn đoán bệnh truyền nhiễm và thuốc phát triển. Chúng mang lại một số lợi thế so với các kỹ thuật khác, chẳng hạn như phương pháp làm mờ vết rạn da và xét nghiệm miễn dịch phóng xạ của phương Tây, bao gồm độ nhạy, độ đặc hiệu và tính đơn giản cao hơn.